聚合酶链式反应(pcr多聚酶链式反应的操作过程)

一、dna聚合酶是怎么形成的

DNA聚合酶是从一种嗜热细菌——栖热水生菌(emphasis:role=italicThermus:aquaticusemphasis)中提纯出来的,经95摄氏度持续温育仍有活性,不会在加热变性的步骤中失活,是目前用于PCR反应的主要用酶。

这种酶具有较强的5′→3′DNA聚合活性和5′→3′外切活性,没有3′→5′外切活性,以带引物的单链DNA为模板,催化互补链的聚合反应,使引物按5′→3′方向延伸,实现DNA的体外扩增。该酶的半衰期较短,在98摄氏度条件下,其半衰期为30min,一般用于扩增1kb左右的DNA片段。

二、链式反应提出者

聚合酶链式反应的发明人是莫里斯博士。

莫里斯1944年12月28日出生于美国南卡罗莱纳州的里诺市,少年时因成绩太差无法进入哈佛、耶鲁等名校,只好考入了乔治亚理工学院,并于1966年获得了化学学士学位。

三、DNA聚合酶的底物是什么意思

DNA聚合酶主要是在DNA复制过程中促进核苷酸聚合,形成DNA分子的一种酶。

DNA聚合酶,它的作用有聚合作用,比如说在引物RNA的羟基末端,然后以dntp为底物,按照模板DNA的指令,然后按通过碱基配对的原则,逐步足够的连续的将dntp延伸到DNA分子的3'羟基末端。

四、DNA聚合酶有哪些功能

DNA聚合酶主要有以下几个功能:

1.DNA复制:在细胞分裂过程中,DNA聚合酶能够复制一个完整的DNA分子,确保每一代细胞都能够遗传到相同的遗传物质。

2.DNA修复:当DNA分子受到损坏时,例如由紫外线、化学物质等导致的损伤,DNA聚合酶能够修复DNA分子中的错误序列,确保正确的DNA信息被遗传到下一代细胞。

3.基因转录:在基因转录过程中,DNA聚合酶能够将DNA分子中的信息复制到RNA分子中,从而完成基因信息的转录和传递。

总的来说,DNA聚合酶是维持生命遗传信息传递完整性的重要酶之一。

五、pcr多聚酶链式反应的操作过程

标准的PCR操作程序是将各种所需反应成分分别加入PCR反应管中,然后根据具体的实验要求,设置一定的循环参数,进行循环扩增。具体如下:

(1)向PCR反应管中依次加入

DNA模板50~300ng(约为102~105拷贝DNA)

引物(3'→5',5'→3')各2μl10μmol/L(终浓度为0.4μmol/L)

dNTP2μl5mmol/L(终浓度为0.2μmol/L)

10×PCR缓冲液5μl1/10体积(终浓度为1×)

MgCl23μl25mmol/L(终浓度为1.5mmol/L)

TaqDNA聚合酶0.5μl(终浓度约1~5U/μl)

ddH2O补到终体积为50μl,混匀后,离心15s使反应成分沉于管底。

(2)加入矿物油20~30μl(2~3滴),以避免反应液蒸发(有热盖的PCR仪可省此步骤),然后将反应管置于95℃(变性)5min。

(3)PCR的循环程序一般为:94℃~96℃变性30s,50℃~55℃退火30~60s,72℃延伸(1kb/1~2min),循环25~30次。末次循环结束后,将反应管置于72℃温育5min,以确保充分延伸。

六、聚合酶链式反应属于哪一科

聚合酶链式反应属于生物科。聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,其最大特点是能将微量的DNA大幅增加希望我说的这个答案能够对你有所帮助啊